技術(shù)專欄
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細(xì)胞內(nèi)的生死游戲：探索細(xì)胞焦亡的奧秘
細(xì)胞焦亡（pyroptosis）是一種新的程序性細(xì)胞死亡方式，其依賴于Gasdermin家族蛋白形成質(zhì)膜膜孔的、可調(diào)控的細(xì)胞死亡，經(jīng)常但并不總因炎癥性Caspase的活化而完成。其形態(tài)學(xué)特征在電鏡下觀察，可清楚看到在細(xì)胞質(zhì)膜破裂前，焦亡的細(xì)胞形成大量小泡，即焦亡小體。之后細(xì)胞膜上會(huì)形成孔隙，細(xì)胞膜破裂，內(nèi)容物流出。 細(xì)胞形態(tài)學(xué)：根據(jù)細(xì)胞形態(tài)變，可初步鑒定細(xì)胞是否發(fā)生焦亡。通過(guò)光學(xué)顯微鏡觀察，可看到胞漿破裂或有大量細(xì)胞碎片的存在。 LDH釋放檢測(cè)：乳酸脫氫酶（LDH）是存在于幾乎所有細(xì)胞內(nèi)的一種酶，當(dāng)細(xì)胞膜破裂時(shí)，LDH能被釋放到培
2023-05-23
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微生物代謝產(chǎn)物氧化三甲胺（TMAO）可以激活抗腫瘤免疫，提高三陰性乳腺癌免疫治療療效
乳腺癌的發(fā)病率逐年增高，并成為中國(guó)女性發(fā)病率最高的惡性腫瘤，是人們常說(shuō)的“紅顏殺手”。其中，三陰性乳腺癌惡性程度較高，患者生存預(yù)后較差，易出現(xiàn)早期復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，且既往缺乏有效的針對(duì)性治療策略，素有最“毒”乳腺癌之稱。近日，復(fù)旦大學(xué)腫瘤醫(yī)院邵志敏教授、江一舟教授課題組攜手復(fù)旦大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院教育部/衛(wèi)健委/醫(yī)科院醫(yī)學(xué)分子病毒學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室趙超課題組，發(fā)現(xiàn)微生物代謝產(chǎn)物氧化三甲胺（TMAO）可以激活抗腫瘤免疫，提高三陰性乳腺癌免疫治療療效。這意味著微生物代謝產(chǎn)物TMAO有望成為三陰性乳腺癌臨床免疫治療的新策略，助推免疫治療。該項(xiàng)重要研究成果已在北京時(shí)間3月12日凌晨在國(guó)際權(quán)威期刊Cell Metabol
2022-12-15
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ELK Biotechnology總結(jié)實(shí)驗(yàn)大鼠、小鼠常用的采血方法
常見(jiàn)小鼠采血方法 小鼠是科研實(shí)驗(yàn)中常用的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，但由于其體積小，血管細(xì)，采血難度大，進(jìn)而影響采血的質(zhì)量。 ELK簡(jiǎn)要總結(jié)了常見(jiàn)的小鼠采血方法，僅供參考： 一只成年小鼠的循環(huán)血量大約是1.5~2.5ml，大約體重的 6~8%。在對(duì)營(yíng)養(yǎng)狀況良好的小鼠進(jìn)行采血時(shí)，單次采血量最多可以到達(dá)循環(huán)血量的10%，（例：若20克小鼠，它的總血量約占1.2-1.4毫升，即每次取120ul-140ul血液不會(huì)對(duì)小鼠有太大的影響）。采血之后應(yīng)該給予溫?zé)岬牡葷B溶液補(bǔ)充，可以在2~3個(gè)星期內(nèi)恢復(fù)原有的水平。兩周采血量小于血液循環(huán)的10%，單周小于7.5%，小鼠血液循環(huán)7
2022-09-20
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ELK組織勻漿樣本的收集處理與保存（史上最全）
? 組織勻漿定義：將分化的細(xì)胞群用物理機(jī)械手段或其它方法，使細(xì)胞破碎，細(xì)胞內(nèi)容物釋放，與細(xì)胞碎片形成的固液混合形式的濃稠液體。 一、取適量組織塊，用預(yù)冷PBS（0.01mol/L, pH 7.0-7.4）沖洗，去除表面殘留的血液與雜質(zhì)。（很多用戶疑惑，這個(gè)適量，到底是多少？ELISA試劑盒檢測(cè)中：血清或細(xì)胞上清樣本用量100μL/指標(biāo)（單孔）；組織用量15mg/指標(biāo)（單孔），差不多干枯綠豆大小。?）具體老鼠各器官大小可見(jiàn)下圖。 二、將組織塊稱重，再剪切成盡可能的小碎塊，以便充分勻漿； 三、可同時(shí)選用多種勻漿方法達(dá)到較好的破碎效果：
2022-09-20
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ELISA實(shí)驗(yàn)中做好標(biāo)曲為什么這么重要
酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)由于其易于操作，可以簡(jiǎn)單地回答樣本中有多少蛋白質(zhì)/多肽/抗體這一基本問(wèn)題，是科研中比較常用的一種檢測(cè)方法。而這種簡(jiǎn)單的分析方法的核心，就是標(biāo)準(zhǔn)曲線。沒(méi)有它，我們的實(shí)驗(yàn)就變成了一個(gè)二元的“是/不是”測(cè)試。有了它，我們可以深入研究生物反應(yīng)的細(xì)節(jié)。那么，是什么使得標(biāo)準(zhǔn)曲線如此強(qiáng)大呢?讓我們?cè)贓LISA的背景來(lái)討論這個(gè)問(wèn)題。 簡(jiǎn)單地說(shuō)，標(biāo)準(zhǔn)品就是一系列已知目標(biāo)蛋白數(shù)量的陽(yáng)性對(duì)照。例如，如果對(duì)人類IgG進(jìn)行ELISA檢測(cè)，標(biāo)準(zhǔn)曲線將包含逐漸減少的已知量的人類IgG，它會(huì)讓你立刻得出一系列的結(jié)論。 1.我的EL
2022-08-01
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NF-κB經(jīng)典信號(hào)通路
NF-kB(核因子激活的B細(xì)胞的k-輕槌增強(qiáng))在細(xì)胞因子誘導(dǎo)的基因表達(dá)中起關(guān)鍵性的調(diào)控作用，它調(diào)控的基因編碼：急性期反應(yīng)蛋白、細(xì)胞因子、細(xì)胞粘附分子、免疫調(diào)節(jié)分子、病毒癌基因、生長(zhǎng)因子、轉(zhuǎn)錄和生長(zhǎng)調(diào)控因子等。通過(guò)調(diào)控多種基因的表達(dá)，NF-kB參與免疫反應(yīng)、炎癥反應(yīng)、細(xì)胞凋亡、腫瘤發(fā)生等多種生物進(jìn)程。 NF-kB家族有由cRel, RelA (p65) , RelB, NF-kB1 (p50)、NF-kB2 (p52)組成,它們?cè)贜端都具有Rel同源結(jié)構(gòu)域，其中cReI, ReIA (p65)和ReIB存在轉(zhuǎn)錄激活區(qū)(TAD)，可正向調(diào)節(jié)基因表達(dá)；p52和p50分別由前體蛋白p100、
2022-07-21
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PCR、qPCR、RT-PCR、Real-time PCR區(qū)別淺析
PCR技術(shù)介紹： 聚合酶鏈反應(yīng)（polymerase chain reaction,PCR）是在體外酶促擴(kuò)增特定DNA片段的技術(shù)，由美國(guó)Kary Mullis及其同事于1985年發(fā)明。熱穩(wěn)定性Taq DNA聚合酶的應(yīng)用和自動(dòng)化裝置的發(fā)明與完善，使PCR技術(shù)進(jìn)入實(shí)用階段。該技術(shù)的發(fā)明和廣泛應(yīng)用，大大推動(dòng)了分子生物學(xué)各相關(guān)學(xué)科的發(fā)展，發(fā)明者也因此獲得了1993年的諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)。 隨著PCR技術(shù)的成熟，派生了不少相關(guān)技術(shù)。這類技術(shù)具有敏感、特異、快速和簡(jiǎn)單等優(yōu)勢(shì)，在微生物檢驗(yàn)中的應(yīng)用越來(lái)越廣，不少國(guó)家將其納入檢驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)方法；
2022-07-13
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PD-1人源化小鼠模型介紹
品系背景∶C57BL/6N 品系構(gòu)建策略∶ 在小鼠PD-1基因位點(diǎn)敲入人源PD-1胞外域序列，保留小鼠跨膜域和胞內(nèi)域，構(gòu)建嵌合型PD-1人源化小鼠模型。 品系說(shuō)明∶ hPD-1在小鼠體內(nèi)具有正常的生理表達(dá)和調(diào)節(jié)模式。 PD-1胞外域人源化，利于hPD-1靶向藥物的識(shí)別。 保留小鼠PD-1胞內(nèi)域，保證正常的胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。 小鼠靶基因不表達(dá)，避免交叉反應(yīng)。 小鼠的免疫系統(tǒng)功能健全。 研究應(yīng)用∶ 本模型可用于評(píng)估hPD-1靶向藥物在免疫健全小鼠體內(nèi)的有效性及安全性∶ 與人源化腫瘤細(xì)胞系聯(lián)用 例如∶與MC38-hPD-L1腫瘤細(xì)胞
2022-05-23
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